转铁蛋白—无血清培养基添加物
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转铁蛋白(Transferrin)于1945年首先在人血清中发现,为无血清培养基必需添加物组分,通过与转铁蛋白受体(Transferrin Receptor , TfR) 相互作用,在无血清细胞培养过程中发挥重要功能。
转铁蛋白是血清中富含的一种糖蛋白,能与三价铁离子可逆性结合。其在铁离子的转运和代谢中发挥着至关重要的作用,同时也是一种重要的胞外抗氧化剂。因此,转铁蛋白是无血清培养基必不可少的添加物。转铁蛋白最初是从血清中分离出来的,然而由于批间差大和安全性差等问题,重组的转铁蛋白被越来越广泛地应用。从各种表达系统,包括植物中获得的重组转铁蛋白均具有相似的活性。
转铁蛋白在无血清培养基中具有非常重要的作用:
避免细胞外环境中自由基的产生,防止细胞受到伤害
维持细胞的生长和增殖
维持细胞内的铁平衡
有研究者试图在无血清培养基中加入铁离子螯合剂,以将铁离子转运到细胞内,从而供细胞的生长所需,这样可以避免使用转铁蛋白,使配制出无蛋白成分的无血清培养基成为可能。铁离子螯合剂虽然也取得了部分成功,但对于绝大多数细胞并不能很好地维持细胞的生长,原因是铁离子螯合剂只有转铁作用,但无调节铁平衡的能力,常会导致细胞内的铁含量过多,进而产生自由基并使细胞受到损伤。
无血清培养基中应该添加提取的转铁蛋白,还是重组的转铁蛋白?
人血浆中转铁蛋白的含量丰富,约为 25mg/ml,占血浆总蛋白的 4%,而且转铁蛋白的种属间交叉活性比较强,所以转铁蛋白多从人或牛的血浆中提取而得。
但提取的转铁蛋白具有安全性差和批间差大等缺陷。尤其是将提取的转铁蛋白添加于用于细胞治疗的无血清培养基中时,可能会将人或动物的病原体(如疯牛病病毒,克雅氏病毒和其它未知病原体)藉回输人体的细胞而带入人体,从而发生非预期的疾病。而重组的转铁蛋白,则可完全避免人或动物病原体污染的可能性,因此更适合用于配制细胞治疗用的无血清培养基。
重组的转铁蛋白与提取的转铁蛋白比较
产品信息
BioGems的Transferrin为Holo-transferrin,Holo-transferrin 除发挥转铁作用外,自身即可作为细胞的铁源,无需在培养基中添加外源性铁。不同细胞,对转铁蛋白的需求量不同,一般原代细胞的推荐浓度为5-100mg/L;中国仓鼠卵巢细胞(CHO)推荐浓度为10-50mg/L;杂交瘤和Vero细胞推荐浓度为5 -20mg/L。具体使用浓度还需根据细胞的种类、状态和想要实现的功能最终通过实验确定。
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