Q1:收到产品后如何处理?
A1:产品在运输过程中由于颠簸,导致部分产品会粘附在管壁或盖子上。我们推荐根据购买的小分子规格进行如下选择:
1)如果规格小于10mg,建议一次性溶解,由于小分子的容器为玻璃瓶,对其进行离心很不方便,因此我们应该关闭超净台风机,打开盖子,根据说明书推荐的溶解浓度加入对应体积的溶剂,用移液管反复吹打管底和管壁,盖上盖子后再颠倒混匀溶解可能残存在盖子上的粉末;
2)如果规格大于10mg,在有精密天平的条件下,可以称取一定质量的粉末(可用EP管先调零天平,再加入粉末,最后称取质量),根据称取的质量加入相应体积的溶剂进行溶解。
Q2:化合物用什么溶解?
A2: 溶剂的选择请参照产品说明书。很多小分子试剂不能直接溶解于水、PBS缓冲液或者生理盐水,可以先用DMSO或乙醇配制储存母液。储存母液通常能够长期保存,并且可以用水性溶剂稀释到体内外实验所需的浓度。通常,小分子产品在这些有机溶剂中的溶解度足够高,可以使用水性溶剂按1:500到1:1000稀释到其工作浓度。一般认为,少量的有机溶剂(例如0.1% DMSO)不会影响生物实验,但是最好建立一个溶剂对照组,以排除溶剂的非特异性影响。
Q3:说明书注明化合物在特定浓度可以溶解,
但化合物还是没有完全溶解,怎么办?
A3:有时需要使用一些辅助溶解的方法,如水浴加热45℃以下,20-30min左右;或者用超声波震荡,15min左右,通常这样处理后化合物都能够完全溶解。如果这样还不能完全溶解,请联系我们技术支持获取更多的帮助。
Q4:如何对工作液进行灭菌?
A4:由于市售的大部分小分子都没有做无菌工艺处理,因此在使用小分子时需要考虑除菌,对于使用DMSO溶解的,因为DMSO本身有很强的杀菌能力,可认为配制好的溶液即为无菌溶液,对于用其它溶剂溶解的小分子可用0.22μm滤膜(有机溶剂专用滤膜)进行过滤除菌。请勿使用紫外、射线或者高压蒸汽灭菌方式,否则可能破坏小分子试剂的化合物结构,影响其活性。
Q5:产品的储存条件是什么?
A5:我们产品说明书上会明确表明该产品的具体储存条件和注意事项,请按照说明书进行保存。建议参照说明书和实验需求,选取合适的溶剂配制母液(DMSO,水,乙醇等)。通常,母液至少是工作液浓度的1000倍以上,分装后放-20℃或者-80℃保存,避免反复冻融。大部分小分子的母液在-20°C下能保存3-12个月,5次以内的反复冻融不会明显影响产品的生物活性。此外,有部分产品溶液不稳定,需要现用现配。对于这些产品,您需要在使用前配制溶液,并在24小时内用完。
Q6:冻存试剂可以室温或37℃水浴解冻吗?
A6:冻存试剂的解冻,建议在冰水浴或者冰浴条件下缓慢解冻。如果时间比较着急,大部分冻存的试剂可以在室温或者37℃水浴解冻,但是需要小心观察,边晃动边溶解,等到试剂部分溶解后,即需从水浴中取出,确保溶解过程中试剂还是接近0℃的。解冻后的试剂可以置于冰水浴或者冰浴中。
Q7:产品未经过灭菌处理能否用于细胞实验?
A7:产品不是无菌状态的,不能保证产品不会污染您的细胞,但是以下几条防范措施可以有效避免细胞污染:1)培养基必须含有青霉素、链霉素等抗生素,它们能够有效避免绝大多数细菌污染;2)使用纯DMSO或者乙醇溶解小分子产品,它们有一定的灭菌能力;3)整个实验过程在无菌条件下完成。
Q8:细胞实验剂量及处理时间如何选择?
A8:建议根据实验室前期的实验结果,同时结合相关的参考文献确定合适的浓度和作用时间;除参考文献外,还需要通过浓度梯度预实验做“剂量-效应”曲线确定最佳作用浓度;通过时间梯度预实验做“时间-效应”曲线确定最佳作用时间。如果没有前期实验结果,也没有相关文献报道,则建议您选择相关的细胞株或者是相关实验目的的其他文献,选择较宽的浓度范围做浓度梯度预实验。同时,小分子试剂的使用量受多种因素影响,比如作用细胞的通透性,可接触性,孵育时间,细胞种类,传代次数等。另外,需要设立溶解小分子试剂时所采用的溶剂作为对照,以排除溶剂的非特异性影响。
Q9:在动物实验中如何使用小分子产品?
(如给药途径、剂量、溶剂以及给药周期等)
A9:建议用双蒸水或PBS缓冲液稀释到实验所需的浓度。若是用DMSO配制的储备母液,为减少对动物的毒性,建议 DMSO 的终浓度不要大于2% 。有些产品在水中的溶解度较低,导致DMSO母液在稀释时析出的,可以通过添加助溶剂来帮助溶解,比如吐温-80、Solutol、甘油、卵磷脂和聚乙二醇等。在动物给药实验中,要综合考虑小分子试剂在体内的实际分布与给药方式(口服、腹腔注射、静脉注射,肌肉注射,皮下注射等)、药物利用率,半衰期,清除率,受体结合量,分布容积等等紧密相关。特定组织或器官吸收试剂的量也往往比分离的细胞吸收量少。
Q10:如果所做动物实验完全没有文献参考
剂量怎么办?
A10:如果没有直接的文献支持,建议查找与自己实验体系接近的文献,比如该小分子试剂在其他动物模型上的剂量、在其他实验目的的剂量等,还可以根据不同实验动物的体表面积进行等效剂量的转换。通过综合考虑得到一个初步的剂量,然后做小规模的预实验进行剂量的优化。动物实验还要考虑给药方式,给药间隔,给药范围,给药体积,以及该小分子试剂的耐受剂量范围,配制药液的稳定性,该小分子试剂的溶剂是否需要等渗等问题。
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